研究デザイン

この多施設共同後ろ向き研究は、9つの病院（明石医療センター、兵庫県立加古川医療センター、北播磨医療センター、甲南医療センター、神戸日赤病院、高槻総合病院、東京中央病院姫路病院、淀川病院、神戸キリスト教病院）で実施された。 ）。 大学病院）日本にある。 参加施設には患者の格差を減らすために市立病院や大学病院も含まれていた。

2018年11月から2021年4月までにベドリズマブで治療を受けたUC患者がこの研究に含まれた。 すべての適格な患者は、日本の潰瘍性大腸炎の診断基準に基づいて潰瘍性大腸炎と診断されました。²⁸。 彼らは、最初のベドリズマブ治療時に中等度から重度の疾患活動性を有しており、メイヨー総合スコア ≥ 6 およびメイヨー内視鏡サブスコア (MES) ≧ 2 として定義されます。²⁹。 分析では、ベドリズマブによる最初の治療前の12か月以内に結腸内視鏡検査で結腸の最も炎症を起こした領域から採取した生検サンプルを使用しました。 ベドリズマブは、標準的な投与スケジュールに従って静脈内投与されました（0、2、6週目に300 mg、その後は8週間ごと）。

患者の特徴（年齢、性別、診断時年齢、罹患期間、喫煙状況）、疾患の特徴（結腸の関与領域、Mayoスコア、MES、C反応性タンパク質）を含むデータ [CRP]およびヘモグロビン）および治療歴（併用薬および生物学的製剤の以前の使用）が収集されました。

研究結果

臨床寛解は、部分メイヨー スコア (PMS; 内視鏡サブスコアなしのメイヨー スコア) ≤ 1 および追加治療なしの直腸出血スコア 0 として定義されました。 副次評価項目は、6週目での臨床寛解率、6週目と22週目での臨床奏効率、22週目での臨床寛解に関連する因子でした。臨床奏効は、PMSが少なくとも2ポイント減少し、少なくとも25ポイント減少したことと定義されました。 ％はベースラインスコアから増加し、直腸出血サブスコアが少なくとも 1 ポイント減少するか、追加の処理なしで絶対直腸出血サブスコアが 0 または 1 になります。 私たちが調査した要因には、患者のベースライン特性と組織学的特徴が含まれていました。 組織学的特徴は、CD45 (赤血球と血小板を除く造血細胞のマーカー)、CD4 (T ヘルパー細胞のマーカー)、および CD68 (マクロファージのマーカー) について免疫組織化学によって評価されました。 組織学的疾患活動性も、Robarts Histopathological Index (RHI) を使用して評価されました。¹⁵ リンパ球性陰窩炎の存在（3 点スケール; 0 = なし、1 = 軽度、2 = 中等度または重度）。 スコアリングは、患者の情報を知らされていない 1 人の病理学者によって行われました。

免疫組織化学

分析では、ベドリズマブ開始前の12か月以内に結腸の最も炎症を起こした領域から採取した生検サンプルを使用しました。 ホルマリン固定し、パラフィン包埋した厚さ 3 μm の組織切片を脱パラフィンし、3% 水素ペルオキシダーゼと 25°C で 5 分間インキュベートすることで内因性ペルオキシダーゼ活性をブロックしました。抗原賦活化は 10 mM クエン酸緩衝液 (pH) を使用して実行しました。 6.0; Vector Laboratories、バーリンゲーム、カリフォルニア州、米国）を圧力鍋（パナソニック、大阪、日本）内で 120°C で 10 分間加熱します。 次に切片を以下の一次抗体とともに 37℃で 30 分間インキュベートしました: CD4 (クローン EPR6855、希釈 1:250、ab133616; Abcam、ケンブリッジ、英国)、CD45 (クローン D9M8I、希釈 1:300、#13917) ; Cell Signaling Technology）および CD68（クローン PG-M1、希釈 1:200、M0876; Agilent Technologies、サンタクララ、英国）。 ネガティブコントロールとして、以下のアイソタイプコントロールを対象の一次抗体と同じ濃度で使用しました: CD4 (ウサギ IgG アイソタイプコントロール、クローン EPR25A、ab172730、アブカム); CD45 (ウサギ IgG アイソタイプコントロール、クローン EPR25A、ab172730、アブカム; CD68 (マウス IgG3 カッパ アイソタイプ コントロール、クローン MG3-35、ab18394、Abcam) トリス緩衝生理食塩水で洗浄した後、切片を二次抗体 (Envision + Dual Link System-HRP、K4061; Agilent Technologies) で 30 分間処理しました。抗原抗体複合体を視覚化するために、ImmPACT DAB 基質ペルオキシダーゼ (SK-4105) を使用し、切片をヘマトキシリンで対比染色しました。正常なリンパ節を陽性対照として同じガラス スライド上に置き、陰性対照は一次抗体の代わりにリン酸緩衝生理食塩水で染色します。

陽性染色された細胞浸潤のレベルを客観的に評価するために、画像解析ソフトウェア（Image J ソフトウェア、バージョン 1.52、米国国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州、米国）を使用して染色領域を定量化しました。 生検情報を知らなかった 2 人の研究者は、写真を撮るために固有層を含む領域をランダムに選択しました。 各生検サンプルについて、重複しない 3 つの連続した顕微鏡視野が特定され、捕捉されました。 陰窩内腔および上皮を除去した後、固有層の総面積を測定した。 CD4、CD45、および CD68 の陽性染色の領域も測定されました。 固有層の単位面積あたりのCD4、CD45、およびCD68陽性染色細胞の面積は、陽性面積を総固有層の面積で割ることによって計算されました。 測定は 400 倍の倍率で実行されました。

統計分析

連続変数は中央値と四分位範囲を使用して要約されます。 カテゴリ変数は数値とパーセンテージで表されます。 グループ間比較では、マン・ホイットニー U 検定を使用して連続変数を比較し、ピアソンのカイ二乗検定を使用して二値変数を比較しました。 ピアソンの相関関係を使用して関係を調べました。 反応者を予測するための独立したマーカーを決定するために、一変量および多変量ロジスティック分析が実行されました。 受信者動作特性（ROC）分析を実行して、CD4 染色陽性を達成するための受信者動作特性曲線下面積（AUC）を計算し、応答者と非応答者を区別しました。 すべての P 値は両側であり、統計的有意性は次のように設定されました。 P.≤ 0.05。 統計分析は、EZR ソフトウェア パッケージ (バージョン 1.40; 自治医科大学埼玉医療センター、埼玉、日本) を使用して実行されました。³⁰。

倫理的配慮

この研究は遡及的な性質を持っているため、研究に参加するための書面によるインフォームドコンセントの要件はオプトアウト方式に置き換えられました。 治験審査委員会（神戸大学病院倫理委員会）は本研究を承認し、インフォームド・コンセントを放棄した（承認番号：B200092）。 すべての方法は、ヘルシンキ宣言の原則および組織の規制およびガイドラインに従って実行されました。